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1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中異嗪皮啶的測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于以刺五加為主要原料的保健食品中異嗪皮啶的測(cè)定。

當(dāng)取樣量2.0g，定容至10mL，進(jìn)樣量10μL時(shí)，方法檢測(cè)限（LOD）為2.0×10的-4次方g/kg，方法的定量限(L0Q)為6.0×10的-4次方g/kg,線性范圍為2.0μg/mL～40μg/mL。

2.原理

根據(jù)異嗪皮啶易溶于甲醇、乙腈、三氯甲烷的理化特性，試樣中異嗪皮啶依次經(jīng)甲醇和三氯甲烷兩種溶液提取，甲醇定容，過(guò)濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相C18色譜柱分離后，由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。

3.試劑和材料

3.1 甲醇(CH4OH):優(yōu)級(jí)純。

3.2 乙酸(CH3COOH):分析純。

3.3 乙腈(CH3CN)：色譜純。

3.4 三氯甲烷(CHCl3)：分析純。

3.5 水(H2O)：為實(shí)驗(yàn)室一級(jí)用水，電導(dǎo)率(25℃)為0.01mS/m。

3.6 異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

3.7 異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.00mg/mL):準(zhǔn)確稱量異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)品0.01g(*至0.0001g)，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混勻(此標(biāo)準(zhǔn)溶液在4℃冰箱中，可保存7d)。

3.8 異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)使用液(100μg/mL):吸取異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00mL于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻(此標(biāo)準(zhǔn)溶液在4℃冰箱中，可保存7d)。

4.儀器和設(shè)備

4.1 高效液相色諧儀：附紫外檢測(cè)器或二級(jí)管陣列檢測(cè)器。

4.2 超聲波清洗器。

5.分析步驟

5.1 試樣處理

根據(jù)試樣含量,稱取0.5g～5g均勻試樣(*稱至0.001g)置于25mL試管中,加入甲醇20mL,超聲波提取20min后,過(guò)濾,用20mL甲醇分3次洗滌殘?jiān)?收集全部濾液,于水浴上蒸干,加適量水溶解并轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,用30mL三氰甲烷分二次萃取,合并三氯甲烷萃取液,于水浴上蒸干,加甲醇溶解并定容至2.0mL,過(guò)0.45μm濾膜,濾液備用。

5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用甲醇稀釋標(biāo)準(zhǔn)使用液,配制成異嗪皮啶標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為2.00μg/mL、4.00μg/mL、8.00μg/mL、,10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL作為標(biāo)準(zhǔn)系列。

5.3 液相色譜參考條件

5.3.1 色譜柱:ODSC18柱,250mm×4.6mm,5μm。

5.3.2 柱溫:35℃。

5.3.3 紫外檢測(cè)器:檢測(cè)波長(zhǎng)343nm。

5.3.4 流動(dòng)相:乙腈+0.1%乙酸溶液=15+85。

5.3.5 流速:1.0mL/min。

5.3.6 進(jìn)樣量:10μL。

5.3.7 色譜分析:取標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜中,以保留時(shí)間定性,以試樣峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

6.結(jié)果計(jì)算

試樣中異嗪皮啶的含量按式(1)進(jìn)行計(jì)算:

…………

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